Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI® MGI®测序平台 Fast-Pace DNA 环化试剂盒-文库及构建-试剂-生物在线

Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI® MGI®测序平台 Fast-Pace DNA 环化试剂盒

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产品名称： Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI® MGI®测序平台 Fast-Pace DNA 环化试剂盒

英文名称： Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI® MGI®测序平台 Fast-Pace DNA 环化试剂盒

产品编号： 13341ES16

产品价格：询价

产品产地：翌圣生物

品牌商标： Yeasen

更新时间： 2025-02-08T17:31:19

使用范围： null

翌圣生物科技（上海）股份有限公司

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产品详情

<div class="Section0"> Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI®是针对 MGI®高通量测序平台专门开发设计的单链环化试剂盒。本产品采用高质量的酶和经优化后的 buffer 组成，显著提高反应效率，使整个环化消化流程在 30 min 内完成。本试剂盒适用于所有连接华大标准接头的文库扩增产物，除建库试剂本身的限制外，本环化试剂盒不限 MGI®测序平台。   产品组分 <div class="tableResponsive" style="color: #3c506c;"> <table style="width: 100%;" border="1" width="100%" cellspacing="1" data-sort="sortDisabled"> <tbody> <tr class="firstRow"> <td colspan="3" rowspan="2" valign="center" width="115"> 组分编号 </td> <td rowspan="2" valign="center" width="222"> 组分名称 </td> <td colspan="3" valign="top" width="373"> 产品编号/规格 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="147"> 13341ES08 </td> <td valign="top" width="93"> 13341ES16 </td> <td valign="top" width="93"> 13341ES96 </td> </tr> <tr> <td colspan="2" valign="top" width="60"> 13341-A </td> <td valign="top" width="34">  <img title="1652406814155249.png" src="https://upload.yeasen.com/website/image/20220513/1652406814155249.png" alt="图片2.png" /> </td> <td valign="center" width="222"> Splint Oligo </td> <td valign="center" width="118"> 48 μL </td> <td valign="center" width="115"> 96 μL </td> <td valign="top" width="101"> 576 μL </td> </tr> <tr> <td colspan="2" valign="top" width="60"> 13341-B </td> <td valign="top" width="34">  <img title="1652406816816515.png" src="https://upload.yeasen.com/website/image/20220513/1652406816816515.png" alt="图片2.png" /> </td> <td valign="center" width="222"> Splint Buffer </td> <td valign="center" width="118"> 120 μL </td> <td valign="center" width="115"> 240 μL </td> <td valign="top" width="101"> 2×720 μL </td> </tr> <tr> <td colspan="2" valign="top" width="60"> 13341-C </td> <td valign="top" width="34"> <img title="1652406682748089.gif" src="https://upload.yeasen.com/website/image/20220513/1652406682748089.gif" alt="spacer.gif" /> <img title="1652406818887863.png" src="https://upload.yeasen.com/website/image/20220513/1652406818887863.png" alt="图片2.png" /> </td> <td valign="center" width="222"> Ligase </td> <td valign="center" width="118"> 40 μL </td> <td valign="center" width="115"> 80 μL </td> <td valign="top" width="101"> 480 μL </td> </tr> <tr> <td colspan="2" valign="top" width="60"> 13341-D </td> <td valign="top" width="34"> <img title="1652406684675159.gif" src="https://upload.yeasen.com/website/image/20220513/1652406684675159.gif" alt="spacer.gif" /> <img title="1652406825498411.png" src="https://upload.yeasen.com/website/image/20220513/1652406825498411.png" alt="图片3.png" /> </td> <td valign="center" width="222"> Digestion Buffer </td> <td valign="center" width="118"> 64 μL </td> <td valign="center" width="115"> 128 μL </td> <td valign="center" width="101"> 768 μL </td> </tr> <tr> <td colspan="2" valign="top" width="60"> 13341-E </td> <td valign="top" width="34"> <img title="1652406686327393.gif" src="https://upload.yeasen.com/website/image/20220513/1652406686327393.gif" alt="spacer.gif" /> <img title="1652406827650571.png" src="https://upload.yeasen.com/website/image/20220513/1652406827650571.png" alt="图片3.png" /> </td> <td valign="center" width="222"> Digestion Enzyme </td> <td valign="center" width="118"> 16 μL </td> <td valign="center" width="115"> 32 μL </td> <td valign="center" width="101"> 192 μL </td> </tr> </tbody> </table> </div>   运输与保存方法 冰袋运输。所有组分-20°C保存，有效期1年。   注意事项 一、关于操作 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。 3. 配制各步骤反应液时推荐使用移液器吹打混匀或轻轻振荡，剧烈振荡可能会造成文库产出下降。 4. 为避免样品交叉污染，推荐使用带滤芯的枪头，吸取不同样品时请更换枪头。 5. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。 6. 定时对各实验区域进行清洁（使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理），以保证实验环境的洁净度。 7. 本产品仅作科研用途！ 二、样本要求及处理 2.1样本量要求 1. 本试剂盒推荐的Input DNA量为1 pmol；若PCR产物不足，最低可降至0.5 pmol投入量。 2. 若有特殊的环化投入量需求，则按照文库制备试剂盒的要求投入所需的 Input DNA 量。 3. 不同片段大小DNA 1 pmol 分子对应不同的质量，可根据公式 1 计算或参考表1选择所需的 Input DNA量： 公式 1 PCR 产物摩尔数与质量间的换算 1 pmol PCR 产物对应的质量 (ng)=DNA 主片段大小 (bp)×0.66 表1  不同片段大小PCR产物1pmol对应产量 <div class="tableResponsive" style="color: #3c506c;"> <table style="width: 100%;" border="1" width="100%" cellspacing="1"> <tbody> <tr class="firstRow"> <td valign="top" width="164"> 插入片段大小（bp） </td> <td valign="top" width="237"> PCR产物主片段大小（bp） </td> <td valign="top" width="237"> 1 pmol对应产量（ng） </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="164"> 150 </td> <td valign="top" width="237"> 230 </td> <td valign="top" width="237"> 152 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="164"> 200 </td> <td valign="top" width="237"> 280 </td> <td valign="top" width="237"> 185 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="164"> 250 </td> <td valign="top" width="237"> 330 </td> <td valign="top" width="237"> 218 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="164"> 300 </td> <td valign="top" width="237"> 380 </td> <td valign="top" width="237"> 251 </td> </tr> </tbody> </table> </div> 2.2 样本混样要求 1. Input DNA可以是单个样本，也可以是多个带有不同Barcodes的样本的混合物。 2. 对样本进行混合时需满足Barcodes混合的要求，可参考表Adapters试剂盒说明书选择合适的Barcodes进行混合。 3. 混合的样本总量推荐为1 pmol，若每个样本所需数据量相同，则等量混合，每个样本所需的质量按照公式2进行计算： 公式 2 混合样本中单个样本所需质量的计算 单个样本所需的质量(ng)=1 pmol Input DNA对应的质量（ng）/混合的样本个数 N 4. 单个样本或混合后样本用于环化时，体积应为34 μL，若不足则用 ddH2O补充至34 μL。 三、关于磁珠纯化（Bead-based Clean Up） 1. 磁珠使用前应先平衡至室温，否则会导致纯化得率下降。 2. 磁珠每次使用前都应充分振荡混匀或使用移液器上下吹打充分混匀。 3. 磁珠漂洗使用的80%乙醇应现用现配，否则将影响回收效率。 4. 产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥。干燥不充分容易造成无水乙醇残留影响后续反应；过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得率。通常情况下，室温干燥约5 min。 5. 单链环产物纯化保存，可使用TE Buffer洗脱，产物可于-20°C可保存1个月。 四、关于文库质检（Library Quality Analysis） 1. 单链环产物纯化后推荐使用 Qubit® ssDNA Assay Kit 单链DNA荧光染料试剂对纯化后产物进行定量。   2. 针对华大智造高通量测序平台， 单链环产物纯化后产量应≥80 fmol（足够2次上机测序）。 3. 可根据公式3计算或参考表2。 公式 3 单链环摩尔数与质量间的换算 80 fmol单链环对应的质量(ng)=0.08×DNA 主片段大小(bp)×0.33 表2  不同PCR产物片段大小对应80fmol单链环产量 <div class="tableResponsive" style="color: #3c506c;"> <table style="width: 100%;" border="1" width="100%" cellspacing="1"> <tbody> <tr class="firstRow"> <td valign="top" width="164"> 插入片段大小（bp） </td> <td valign="top" width="237"> PCR产物主片段大小（bp） </td> <td valign="top" width="237"> 80 fmol对应产量（ng） </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="164"> 150 </td> <td valign="top" width="237"> 230 </td> <td valign="top" width="237"> 6.07 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="164"> 200 </td> <td valign="top" width="237"> 280 </td> <td valign="top" width="237"> 7.39 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="164"> 250 </td> <td valign="top" width="237"> 330 </td> <td valign="top" width="237"> 8.71 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="164"> 300 </td> <td valign="top" width="237"> 380 </td> <td valign="top" width="237"> 10.03 </td> </tr> </tbody> </table> </div>   使用方法 一、自备材料 1. 纯化磁珠：Cat#12601，Hieff NGS® DNA Selection Beads或Cat#A63880，AMPure XP Beads或其他等效产品。 2. 文库质控：Cat # Q10212, Thermo fisher Qubit® ssDNA Assay Kit。 3. 其他材料：无水乙醇、灭菌超纯水、TE Buffer（10 mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5+0.1 mM EDTA）、低吸附EP管、PCR管、磁力架、PCR仪等。 二、操作流程 <img title="1652406587330616.png" src="https://upload.yeasen.com/website/image/20220513/1652406587330616.png" alt="图片1.png" />   图1  单链环化文库构建流程 三、操作步骤 3.1 变性 1. 根据文库长度，取1 pmol 至0.2 ml PCR管中，用ddH2O补充至34 μL。 2. 将表3中试剂解冻后，颠倒混匀并置于冰上备用。 3. 于冰上配制表3反应体系。 表3  DNA变性体系 <div class="tableResponsive" style="color: #3c506c;"> <table style="width: 100%;" border="1" width="100%" cellspacing="1"> <tbody> <tr class="firstRow"> <td valign="top" width="328"> 名称 </td> <td valign="top" width="328"> 体积（μL） </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> 单个或混合好的双链文库 </td> <td valign="top" width="328"> 34 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> Splint Oligo </td> <td valign="top" width="328"> 6 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> Total </td> <td valign="top" width="328"> 40 </td> </tr> </tbody> </table> </div> 4. 混匀后，在PCR仪上进行98℃变性3 min，之后立即置于冰上，冰浴2 min 后瞬时离心。 3.2 单链环化 1. 将表4中各试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。 2. 于冰上配制表4反应体系。 表4  单链环化体系 <div class="tableResponsive" style="color: #3c506c;"> <table style="width: 100%;" border="1" width="100%" cellspacing="1"> <tbody> <tr class="firstRow"> <td valign="top" width="328"> 名称 </td> <td valign="top" width="328"> 体积（μL） </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> 上一步反应物 </td> <td valign="top" width="328"> 40 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> Splint Buffer </td> <td valign="top" width="328"> 15 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> Ligase </td> <td valign="top" width="328"> 5 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> Total </td> <td valign="top" width="328"> 60 </td> </tr> </tbody> </table> </div> 3. 使用移液器轻轻吹打或低速振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。 4. 将PCR管置于PCR仪上，按照表5所示设置反应程序，进行单链环化反应。 表5单链环化反应程序 <div class="tableResponsive" style="color: #3c506c;"> <table style="width: 100%;" border="1" width="100%" cellspacing="1"> <tbody> <tr class="firstRow"> <td valign="top" width="328"> 温度 </td> <td valign="top" width="328"> 时间 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> 热盖105°C </td> <td valign="top" width="328"> OFF </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> 37°C </td> <td valign="top" width="328"> 15min </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> 4°C </td> <td valign="top" width="328"> Hold </td> </tr> </tbody> </table> </div> 3.3 酶切消化 1. 将表6中各试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。 2. 于冰上配制表6所示反应体系。 表6  酶切消化体系 <div class="tableResponsive" style="color: #3c506c;"> <table style="width: 100%;" border="1" width="100%" cellspacing="1"> <tbody> <tr class="firstRow"> <td valign="top" width="328"> 名称 </td> <td valign="top" width="328"> 体积（μL） </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> 上一步反应物 </td> <td valign="top" width="328"> 60 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> Digestion Buffer </td> <td valign="top" width="328"> 8 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> Digestion Enzyme </td> <td valign="top" width="328"> 2 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="328"> Total </td> <td valign="top" width="328"> 70 </td> </tr> </tbody> </table> </div> 3. 使用移液器轻轻吹打或低速振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。 4. 将PCR管置于PCR仪上，按照表7的条件进行反应： 表7  酶切消化反应程序 <div class="tableResponsive" style="color: #3c506c;"> <table style="width: 100%;" border="1" width="100%" cellspacing="1"> <tbody> <tr class="firstRow"> <td valign="top" width="324"> 温度 </td> <td valign="top" width="324"> 时间 </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="324"> 热盖105°C </td> <td valign="top" width="324"> OFF </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="324"> 37°C </td> <td valign="top" width="324"> 10 min </td> </tr> <tr> <td valign="top" width="324"> 4°C </td> <td valign="top" width="324"> Hold </td> </tr> </tbody> </table> </div> 5. 反应结束后，瞬时离心，立即进行纯化。 3.4 消化产物纯化 该步骤使用磁珠对3.3步骤的产物进行纯化。 1. 准备工作：将Hieff NGS® DNA Selection Beads或 Beckman AMPure XP Beads由冰箱中取出，室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。 2. 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。 3. 吸取120 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads至消化产物中，涡旋或吹打混匀，室温孵10min。 4. 将PCR管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约2 min），小心移除上清。 5. 保持PCR管始终置于磁力架中，加入200μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30 sec后，小心移除上清。 6. 重复步骤5，总计漂洗两次。 7. 保持PCR管始终置于磁力架中，开盖空气干燥磁珠至刚刚出现龟裂。 8. 将PCR管从磁力架中取出，加入22 μL TE Buffer，涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置10 min。 9. 短暂离心，将 PCR 管始终置于磁力架中静置，待溶液澄清后（约 2min），将上清小心移至新 PCR 管中。 ★停止点：环化纯化产物，可置于-20℃储存一个月。 3.4 消化产物质控 使用Qubit® ssDNA Assay Kit荧光试剂对酶切消化产物进行定量，具体请参见注意事项四。   HB220426 </div>