杂交瘤实验技术详解‌

随着生物技术的飞速发展，杂交瘤技术作为单克隆抗体制备的重要手段，在生物学、药学和医学等领域中发挥着越来越重要的作用。本文将详细介绍杂交瘤实验的基本原理、实验流程及其注意事项，以为相关研究人员提供参考。

一、杂交瘤技术的基本原理

杂交瘤技术，又称单克隆抗体技术，是指通过细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，形成能在体外长期存活并分泌免疫蛋白的杂交瘤细胞。这些杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞无限增殖的特性，又保留了B淋巴细胞分泌特异性抗体的能力。通过克隆化，可以得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系，其产生的抗体是针对同一抗原结合位点的单克隆抗体。

二、实验流程

1. 免疫抗原制备与动物免疫

首先，选择合适的免疫抗原，如蛋白、多肽或小分子等。然后，选用Balb/c小鼠等免疫动物，通过皮下注射、腹腔注射等途径进行免疫。常规免疫周期包括初次免疫、第二次免疫、第三次免疫和冲击免疫，以刺激小鼠产生大量的特异性抗体。（Frdbio水溶性纳米佐剂MAC0021，显著提高抗体效价，缩短免疫时长）

2. 细胞融合

在细胞融合前，需要准备处于对数生长期的骨髓瘤细胞(SP20MAC0022)和免疫后的脾细胞。细胞融合的方法有多种，包括病毒介导的细胞融合、聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合和电融合等。其中，PEG介导的细胞融合是最常用的方法之一(Frdbio®PEG1450融合剂MAC0011),针对新手我们推出了单抗融合无忧套装MAC0001，助力您的实验顺利完成。

通过融合，可以得到未融合脾细胞、未融合骨髓瘤细胞、脾细胞-脾细胞融合体、骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞融合体和脾细胞-骨髓瘤细胞杂合体（杂交瘤细胞）等多种细胞类型。我司推出（杂交瘤细胞培养添加因子（10X））MAC0014，这款产品可以让实验者省去杀小鼠过程，减少实验不必要的污染等特点。

3. 杂交瘤细胞筛选

融合后的细胞需要在含有次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶（T）的HAT培养基中进行筛选（HAT培养基添加剂MAC0013）。由于骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（HGPRT），对氨基喋呤敏感，因此无法在HAT培养基中存活。而正常的脾细胞在培养基中仅能存活5-7天，因此只有融合的杂交瘤细胞能在HAT培养基中长期存活与繁殖。经过筛选，可以得到能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。

4. 克隆化与抗体特异性检测

将筛选出的阳性杂交瘤细胞进行克隆化，以确保获得纯化的单克隆抗体。常用的克隆化方法有有限稀释法和软琼脂平板法等。同时，还需要采用ELISA等方法对克隆化后的杂交瘤细胞进行抗体特异性检测，以确保其产生的抗体是针对目标抗原的特异性抗体。（鼠单抗Ig类/亚类/亚型鉴定用酶标二抗套装（8种）FRD90100P8 针对抗体的亚型进行鉴定。

5. 抗体大量制备

获得稳定的杂交瘤细胞株后，可以采用体外培养法或腹水制备法大量制备单克隆抗体。体外培养法包括单层细胞培养和悬浮培养等，而腹水制备法则是通过将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内产生腹水来获得大量的单克隆抗体。另外我司推出无血清培养抗体（杂交瘤细胞无血清培养液MAC0010S）缩短实验进程，经测试抗体纯度更高。

三、注意事项

1. 在细胞融合前，需要确保骨髓瘤细胞和脾细胞处于良好的生长状态，以提高融合率。

2. 在HAT培养基中筛选杂交瘤细胞时，需要注意培养基的成分和浓度，以确保筛选的准确性。

3. 在克隆化和抗体特异性检测过程中，需要严格控制实验条件，以避免污染和误差。

4. 在抗体大量制备时，需要根据实际需求选择合适的制备方法，并注意对制备过程进行监控和优化。